La técnica de Kirby-Bauer es un método microbiológico estándar que se utiliza para determinar la susceptibilidad de las bacterias a los agentes antimicrobianos. Consiste en medir la zona de inhibición del crecimiento bacteriano alrededor de discos impregnados de antibióticos colocados sobre una placa de agar inoculada con el organismo de prueba. Estos son los pasos generales de la técnica de Kirby-Bauer:
1. Preparación del Inóculo :
- Se obtiene un cultivo puro de la cepa bacteriana de prueba y se cultiva en un caldo de cultivo adecuado para alcanzar la fase de crecimiento logarítmico (turbidez).
- La suspensión bacteriana está estandarizada a una turbidez específica, normalmente equivalente a un estándar de turbidez de 0,5 McFarland, para garantizar una densidad de inóculo constante.
2. Inoculación de Placa de Agar :
- Para la prueba se utilizan placas de agar estériles que contienen agar Mueller-Hinton u otro medio de agar apropiado.
- Utilizando un hisopo de algodón estéril, el inóculo estandarizado se extiende uniformemente sobre la superficie de la placa de agar para crear un césped confluente de crecimiento bacteriano.
- Se deja secar la placa inoculada durante unos minutos para que absorba el exceso de humedad.
3. Aplicación de discos antibióticos :
- Se colocan discos de antibióticos estériles que contienen concentraciones específicas de agentes antimicrobianos sobre la superficie de la placa de agar a intervalos espaciados uniformemente utilizando unas pinzas estériles o un dispensador de discos.
- Los discos se presionan suavemente para asegurar un buen contacto con la superficie del agar sin dañar los discos.
4. Incubación :
- La placa inoculada con discos de antibióticos se incuba a una temperatura adecuada (normalmente 35-37°C) durante un período específico (normalmente 16-24 horas) para permitir el crecimiento bacteriano y la difusión de agentes antimicrobianos.
5. Medición de zonas de inhibición :
- Después de la incubación, se examinan las placas para detectar la presencia de zonas de inhibición alrededor de los discos de antibióticos.
- Utilizando una regla o un pie de rey digital, se mide el diámetro de cada zona de inhibición en milímetros.
- El diámetro de la zona indica la susceptibilidad del organismo de prueba al antibiótico específico.
6. Interpretación de los resultados :
- Los diámetros de zona medidos se comparan con tablas o pautas estandarizadas, como las proporcionadas por el Clinical and Laboratory Standards Institute (CLSI), para determinar la susceptibilidad o resistencia del organismo de prueba a los agentes antimicrobianos probados.
- Los organismos se clasifican en susceptibles, intermedios o resistentes según el tamaño de las zonas de inhibición y los criterios interpretativos establecidos.
7. Control de calidad :
- Para garantizar la precisión y confiabilidad de la técnica de Kirby-Bauer, en cada lote de pruebas se incluyen cepas de control de calidad con patrones de susceptibilidad conocidos para monitorear el desempeño del método y los reactivos utilizados.
Es importante seguir procedimientos estandarizados e interpretar los resultados de acuerdo con las pautas establecidas para obtener información confiable y clínicamente relevante de las pruebas de susceptibilidad a los antibióticos de Kirby-Bauer.