Personajes principales:
* Sherlock Holmes: El brillante detective, conocido por su razonamiento deductivo y su capacidad de observación.
* Dra. John H. Watson: El fiel amigo y cronista de Holmes, que a menudo sirve como punto de vista del lector.
* Mary Morstan: Una joven que busca información sobre la desaparición de su padre y el misterioso "Signo del Cuatro" que recibe.
* Jonathan Pequeño: El villano, pero en última instancia trágico, cerebro detrás del robo del tesoro de Agra y el "Signo de los Cuatro".
* Tadeo Sholto: Ex cómplice de Jonathan Small, que hereda una parte del tesoro de Agra. Es asesinado antes de que comience la historia.
* Athelney Jones: Un detective de Scotland Yard, a menudo ridiculizado por Holmes por su enfoque demasiado metódico y menos intuitivo.
Otros personajes importantes:
* Sra. Hudson: La casera del 221B de Baker Street, donde residen Holmes y Watson.
* La tribu Tonga: Un grupo de nativos de las islas Andamán, leales a Jonathan Small y acostumbrados a llevar a cabo sus planes.
* El "Signo de los Cuatro": Nombre que reciben cuatro objetos únicos:un alfiler de plata, una pequeña caja decorada, un trozo de tubo de plomo y un collar de perro. Estos artículos están asociados con el robo del tesoro de Agra.
Personajes secundarios:
* Bartolomé Sholto: El hermano de Thaddeus, que hereda una parte del tesoro de Agra y se convierte en el objetivo de Jonathan Small.
* Sra. Sholto: La madre de Tadeo y Bartolomé, que está preocupada por su seguridad.
* Sra. Morstan (madre de María): Una mujer que una vez estuvo enamorada de Thaddeus Sholto y que murió en circunstancias misteriosas.
* Inspector Bradstreet: Un inspector de Scotland Yard que trabaja con Athelney Jones.
Es importante recordar que, si bien la historia se centra principalmente en los personajes principales, muchos personajes secundarios añaden capas a la trama y contribuyen a la atmósfera general de la novela.