Matilda: Una hermosa joven que es objeto del deseo de Ambrosio. Ambrosio finalmente la mata después de que ella lo rechaza.
Inés: Una joven monja que es alumna de Ambrosio. Es seducida por Ambrosio y queda embarazada. Finalmente muere al dar a luz.
Don Raymond: El abad del monasterio donde vive Ambrosio. Es un hombre sabio y justo que intenta ayudar a Ambrosio a superar sus tentaciones.
Doña Elvira: Una mujer rica y poderosa que se convierte en la amante de Ambrosio. Finalmente ella lo traiciona y lo entrega a la Inquisición.
El Inquisidor: Un hombre poderoso y despiadado que preside el juicio de Ambrosio y finalmente lo condena a muerte.