Un gel de poliacrilamida se prepara con ranuras en el mismo. El gel se forma mediante el vertido de una solución de poliacrilamida líquido caliente en una caja de poca profundidad. La caja debe contener una estructura en forma de peine con dientes que apuntan hacia abajo en la solución . La poliacrilamida se convierte en un gel pronto después de que se ha vertido y el peine se retira para revelar agujeros rectangulares .
De sodio dodecil sulfato (SDS )
La proteína se trata con dodecil sulfato de sodio (SDS ) con el fin de desnaturalizar las subunidades de una proteína grande de modo que cada uno se puede medir por separado. Las ventajas de esto son que el SDS da los polipéptidos una carga negativa así que migrarán hacia el extremo negativo , o ánodo , del gel. En segundo lugar , el SDS se asegura de todas las subunidades tendrán la misma carga y por lo tanto todos migrar en el gel de acuerdo con sus masas moleculares en lugar de cargos .
La adición de proteína
una pequeña cantidad de ADN o proteína se coloca en uno de los orificios rectangulares en un extremo del gel. Una corriente eléctrica se ejecuta a través del gel a pH neutro. Alrededor de 10 microlitros de una escalera de ADN , así como dos controles también se cargan en el gel. La escalera del ADN se utiliza para permitir la medición de hasta qué punto la muestra se trasladó en el proceso de electroforesis .
Electroforesis
La máquina se enciende a 100 voltios y dejar una duración de 30 minutos . Después de que las muestras han sido a electroforesis durante 30 minutos , el gel junto con una bandeja se retira y se coloca en una bandeja de tinción durante unos tres minutos . Esto es seguido por la colocación del gel en agua caliente durante cinco minutos . El gel está ahora listo para ser colocado en la caja de luz con el fin de observar el movimiento de los fragmentos de ADN .
Otras consideraciones
Al visualizar el gel bajo la luz , algunas cosas importantes que deben ser tomados en consideración . Una célula puede ser homocigotos o heterocigotos para el gen dependiendo de si la copia está presente o no presente en ambas copias o en uno solo. El resultado heterocigoto puede aparecer como una sola banda debido a que los segmentos de ADN que se amplifican de manera más eficiente aparecen más oscura en el gel. También se añade un tinte de modo que cada polipéptido puede ser visto tanto durante como después de la electroforesis .