- La esposa de Horatio Caine, Marina, interpretada por Sofia Milos: Marina Caim fue la esposa de Horatio durante las primeras temporadas del programa. Originalmente era una investigadora privada que ayudaba a Horatio en algunos casos. Sin embargo, su matrimonio finalmente se vino abajo debido a la dedicación de Horatio a su trabajo.
- Calleigh Duquesne, interpretada por Emily Procter: Calleigh Duquesne es CSI Nivel 3 e hija de un oficial de policía de Miami. Es una científica forense experta y es conocida por su experiencia en análisis de ADN e identificación de armas de fuego.
- Natalia Boa Vista, interpretada por Eva LaRue: Natalia Boa Vista se une al equipo en la temporada 5 como CSI Nivel 2. Es una ex policía encubierta y tiene experiencia en psicología, lo que la ayuda a comprender las motivaciones de los delincuentes.
- La esposa de Delko, Marisol Delko, interpretada por Elizabeth Berkley Lauren: Marisol Delko es la esposa de Eric Delko. Se casan en el final de la temporada 4. Marisol también trabaja como detective de homicidios en Miami.
- Yelina Salas, interpretada por Sofia Vassilieva: Yelina Salas se une al equipo en la temporada 9. Es hija de un mafioso ruso y tiene conocimientos sobre el funcionamiento interno de las organizaciones criminales.