- Elizabeth Shaw: Un joven científico que forma parte de la tripulación de la nave espacial Prometheus. Su fe la impulsa a encontrar a los Ingenieros, los creadores de la humanidad.
- David: Un androide que también es miembro de la tripulación de Prometheus. Es muy inteligente y curioso, pero también despiadado y calculador.
- Weyland: El director ejecutivo de Weyland Corp., la empresa que financió la expedición Prometheus. Está obsesionado con encontrar a los ingenieros y conseguir la inmortalidad.
- Meredith Vickers: El representante de Weyland Corp. en el Prometheus. Es una empresaria despiadada y ambiciosa que está dispuesta a todo para conseguir sus objetivos.
- Janek: El capitán del Prometeo. Es un astronauta veterano que intenta mantener segura a su tripulación y al mismo tiempo cumplir los objetivos de la misión.
- Hueco: Un biólogo del Prometheus que es la pareja romántica de Shaw. Está fascinado por los ingenieros y sus creaciones.
- Fifield: Un geólogo del Prometheus que está ansioso por explorar la luna alienígena. Es imprudente e impulsivo y, a menudo, se pone a sí mismo y a sus compañeros de tripulación en peligro.